處理培養(yǎng)細(xì)胞

從 19 世紀(jì)末開(kāi)始，科學(xué)家們就從各種生物體（例如人類(lèi)、小鼠、豬、雞和植物）中分離出自然環(huán)境中的細(xì)胞，并將它們置于體外（拉丁語(yǔ)“玻璃中"）中。 ） 文化。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是從許多不同的組織和器官中提取的，例如腸、腎、血液、腦、乳腺和許多癌癥實(shí)體。

體外培養(yǎng)細(xì)胞的目的是模擬培養(yǎng)箱內(nèi)的體內(nèi)（拉丁語(yǔ)“活體中"）條件，或者在進(jìn)行活細(xì)胞成像時(shí)甚至在顯微鏡下模擬體內(nèi)條件。每種細(xì)胞類(lèi)型都需要定制培養(yǎng)參數(shù)，以實(shí)現(xiàn)最佳的健康、活力和生長(zhǎng)。對(duì)于所有實(shí)驗(yàn)，保持條件無(wú)菌、均質(zhì)和可重復(fù)至關(guān)重要，以獲得可比較的結(jié)果。

傳代、接種和冷凍細(xì)胞

為了保持細(xì)胞處于增殖狀態(tài)，并防止它們達(dá)到過(guò)度匯合，以規(guī)定的時(shí)間間隔進(jìn)行傳代非常重要。必須定期進(jìn)行細(xì)胞傳代，以保持細(xì)胞處于培養(yǎng)狀態(tài)、實(shí)現(xiàn)體積放大或在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)接種它們。該過(guò)程也稱(chēng)為細(xì)胞分裂或傳代培養(yǎng)。除其他因素外，傳代的最佳時(shí)間取決于增殖率以及所需的細(xì)胞數(shù)量。每種細(xì)胞類(lèi)型的確切裂解方案都是b的。一般來(lái)說(shuō)，貼壁細(xì)胞使用蛋白水解酶（主要是胰蛋白酶/EDTA）從基質(zhì)上分離，這對(duì)于消化其蛋白質(zhì)附著鍵是必需的。接下來(lái)，將細(xì)胞勻漿、計(jì)數(shù)并接種到新容器中，從而將傳代次數(shù)增加一倍。

傳代/傳代=將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)皿和生長(zhǎng)培養(yǎng)基中

一些細(xì)胞系，例如 HeLa 或其他缺乏細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的癌細(xì)胞，可以無(wú)限傳代而不喪失分裂能力（永生細(xì)胞系）。此外，某些胚胎細(xì)胞類(lèi)型或多能干細(xì)胞也是如此。其他細(xì)胞，特別是原代細(xì)胞（例如，從成體器官中分離的細(xì)胞），在幾次傳代后將失去這種能力，因?yàn)樗鼈円唇?jīng)歷衰老，要么分化，要么死亡。因此，使用具有相似傳代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)非常重要。

對(duì)于細(xì)胞接種，需要選擇適合各自細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞培養(yǎng)容器和實(shí)驗(yàn)裝置的密度。如果密度太低，細(xì)胞可能會(huì)由于生長(zhǎng)因子釋放到培養(yǎng)基中不足而停止生長(zhǎng)。缺乏細(xì)胞間和細(xì)胞間基質(zhì)通訊的單個(gè)細(xì)胞甚至可能因一種特殊形式的程序性細(xì)胞死亡（稱(chēng)為失巢凋亡）而死亡。如果接種密度太高，細(xì)胞可能在很短的時(shí)間內(nèi)就已經(jīng)達(dá)到過(guò)度匯合。這會(huì)導(dǎo)致增殖受損和細(xì)胞與基質(zhì)分離，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)條件不可重復(fù)。

標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞類(lèi)型可在 –80°C 下短期保存，或在液氮中長(zhǎng)期保存。為此，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶化、均質(zhì)化和離心，然后使用特殊的冷凍介質(zhì)進(jìn)行冷凍。為了對(duì)抗此過(guò)程引起的細(xì)胞應(yīng)激，建議使用具有高回收率的冷凍介質(zhì)。此外，解凍過(guò)程必須快速進(jìn)行（例如，在37°C的水浴中），然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中并將其放入培養(yǎng)箱中以創(chuàng)造生理?xiàng)l件。