抗體是廣泛研究和體外診斷 (IVD) 應(yīng)用的核心試劑。根據(jù)生產(chǎn)方法，它們可以分為多克隆或單克隆，或者根據(jù)它們識(shí)別的靶標(biāo)類型分為主要或次要試劑。選擇抗體時(shí)要考慮的因素包括其驗(yàn)證的嚴(yán)格程度以及它們是否有足夠的數(shù)量來(lái)滿足特定項(xiàng)目的長(zhǎng)期需求。

什么是多克隆抗體和單克隆抗體？

已建立的抗體生產(chǎn)方法是通過用感興趣的蛋白質(zhì)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫來(lái)啟動(dòng)的。然后由抗原呈遞細(xì)胞處理，以便能夠通過循環(huán) B 淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè) B 淋巴細(xì)胞在其表面表達(dá)不一樣的抗體。目標(biāo)識(shí)別后，B 淋巴細(xì)胞進(jìn)行克隆擴(kuò)增并分泌可從血清中純化的抗體。以這種方式產(chǎn)生的抗體被描述為多克隆的，因?yàn)樗卯a(chǎn)物包含來(lái)自多個(gè)B淋巴細(xì)胞的抗體，每個(gè)B淋巴細(xì)胞識(shí)別不同的表位。

作為該方法的替代方法，可以分離 B 淋巴細(xì)胞并用于產(chǎn)生雜交瘤。通過在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中稀釋它們，使得多孔板的每個(gè)孔僅接收一個(gè)雜交瘤，可以測(cè)試細(xì)胞上清液并鑒定表現(xiàn)很好的克隆。通過這種方法產(chǎn)生的抗體被描述為單克隆抗體，因?yàn)樽罱K產(chǎn)品中的每種抗體都是相同的。多克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是，由于表位冗余，它們可以提供信號(hào)放大，而單克隆抗體則受益于高特異性、一致的性能和有保證的長(zhǎng)期供應(yīng)。

什么是一抗和二抗？

一抗直接與特定抗原（例如細(xì)胞骨架蛋白或細(xì)胞因子）結(jié)合，而二抗則用于間接檢測(cè)。這意味著只有當(dāng)一抗識(shí)別出它們的靶標(biāo)時(shí)，它們才會(huì)與一抗結(jié)合。二抗是通過使用其他物種的抗體對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種來(lái)產(chǎn)生的，并且通常用于通過多個(gè)二抗與每個(gè)一抗的結(jié)合來(lái)提供信號(hào)放大。

抗體選擇的注意事項(xiàng)

選擇抗體時(shí)需要考慮的因素包括是使用多克隆還是單克隆、是否需要直接或間接檢測(cè)以及將采用什么類型的讀數(shù)。雖然辣根過氧化物酶 (HRP) 等酶通常用于比色或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，但熒光團(tuán)更適合流式細(xì)胞術(shù)或免疫組織化學(xué) (IHC) 等多重應(yīng)用。至關(guān)重要的是，應(yīng)該證明抗體試劑能夠特異性識(shí)別其目標(biāo)抗原，而不會(huì)表現(xiàn)出不需要的交叉反應(yīng)。

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